Мануальный подсчет количества тромбоцитов у кошек и собак – новая версия

Введение

Использование современных ветеринарных гематологических приборов для подсчета количества тромбоцитов у кошек и собак является аккуратным, чувствительным и точным методом определения и оценки тромбоцитопении и они должны широко использоваться везде, где это возможно. Тромбоцитопения кошек является распространенным начальным ключом в начале многих заболеваний, инструментальный подсчет тромбоцитов у кошек и собак превосходит по качеству диагностики по сравнению с мануальным, особенно это касается случаев выявления легкой и умеренной тромбоцитопении. Инструментальный подсчет тромбоцитов кошек и собак по сравнению с мануальным остается предпочтительными методом диагностики изменения количества тромбоцитов, а также лучшим методом мониторинга ответа на лечение. Референсные значения количества тромбоцитов могут зависеть от конкретного прибора, метода и породы животного; поэтому специфические референсные показатели улучшают чувствительность в определении степени мягкой и умеренной тромбоцитопении.

Однако, оценка мазка крови часто дает адекватную оценку для начальной быстрой диагностики тяжелой тромбоцитопении кошек и собак. Тяжелая тромбоцитопения является распространенной причиной кровотечения, и оценка количества тромбоцитов в мазке быстро позволяет прийти к выводу в тех случаях, когда приборы не доступны по тем или иным причинам. В качестве вывода можно сказать, что подсчет тромбоцитов в мазке крови собак и кошек является быстрым, дешевым и обычно адекватным средством диагностики тяжелых отклонений количества тромбоцитов у кошек и собак.

После рутинного приготовления и окраски мазка крови, для оценки количества тромбоцитов должно проводиться определение среднего количества тромбоцитов в 5-10 полях зрения микроскопа с иммерсионным объективом (пр. 1000 х увеличение). У собак в норме обычно идентифицируется 8-29 тромбоцитов в поле зрения, и кошки в норме должны иметь 10-29 тромбоцитов в поле зрения. При тяжелой тромбоцитопении ведущей к кровотечению, идентифицируется от 0 до 3 тромбоцитов в поле зрения.

Подсчет количества тромбоцитов у собак и кошек должно происходить в зоне тонкого монослоя, в большинстве мазков он определяется в том месте, где эритроциты не часто прикасаются друг с другом, а у собак отмечается центральная бледность в эритроцитах. При анемии на фоне кровотечения животные имеют меньше эритроцитов в поле зрения, поэтому легко переместить внимание в более глубоко в толстый слой мазка.

Альтернативно следует рассмотреть, что каждый тромбоцитов в иммерсионном поле зрения соответствуем примерно 15.000-20.000 тромбоцитов/мкл. Существуют вариации в количестве тромбоцитов, наблюдаемых в поле зрения в зависимости от объектива микроскопа, лучший объектив имеет большее поле зрения.

При оценке мазка крови на фоне подсчета количества тромбоцитов кошек и собак вначале необходимо убедиться в однородном распространении тромбоцитов, следует выявлять агрегаты тромбоцитов для убеждения в аккуратности подсчета. Скопления тромбоцитов с размером позволяющим определить их при сканирующем увеличении обычно отходят на дистальный конец мазка (оперенная зона мазка). При наличии большого количества скоплений тромбоцитов, все методы подсчета количества тромбоцитов у кошек и собак (инструментальный, мануальный) будут давать неверные результаты, чаще заниженные. При необходимости получить аккуратные результаты количества тромбоцитов у пациента, должен быть произведен повторный забор образцов крови таким способом, чтобы избегать агрегации кровяных пластинок. Агрегация эритроцитов или лейкоцитов также дают технические ошибки при подсчете количества тромбоцитов. Все пробирки с антикоагулянтом перед приготовлением мазка крови должны исследоваться на признаки макро-коагуляции, и при выявлении таковой образец не стоит готовить мазок, или отправлять в лабораторию.

При подсчете тромбоцитов кошек всегда следует помнить, что у данного вида они имеют сильную тенденцию для формирования скоплений, что часто даёт неверное и низкое количество тромбоцитов при определении любым методом (хоть мануальным, хоть инструментальным). Простагландин E₁ (PGE₁) при его добавлении в образец крови кошек предотвращает агрегацию тромбоцитов (предпочтителен набор крови в пробирку с простагландином E₁) повышает аккуратность подсчета количества тромбоцитов на 60%, по сравнению с образцами крови кошек без добавления данного препарата. Недостатком данного метода является высокая стоимость PGE₁, и необходимость его заморозки вплоть до начала использования, но он может использоваться у кошек с вероятной тромбоцитопенией и у собак с персистирующей агрегацией тромбоцитов в образце крови. К счастью, истинная и тяжелая тромбоцитопения у кошек отмечается редко. При миелопролиферативных заболеваниях кошек, значительное количество больших тромбоцитов с причудливой формой может быть не подсчитано.

Другая проблема при подсчете количества тромбоцитов у кошек и собак состоит в ошибочном подсчете измененных частиц крови, принятых за красные кровяные пластинки. Так, клетки тени являются достаточной распространенной проблемой при анализе мазков на фоне иммунно-опосредованной гемолитической анемии (АИГА, IMHA). Также, частично лизированные эритроциты могут быть приняты за тромбоциты при анализе мазка крови у кошек и собак.

Отсроченный анализ количества тромбоцитов у кошек и собак часто ведет к формированию их скопления (агрегации), что в конечном итоге снижает общее количество красных кровяных пластинок. В большинстве лабораторий установлено ограничения времени с момента забора крови для подсчета количества тромбоцитов кошек и собак, оно может составлять от 30 минут до 6 часов. Данное время во многом может зависеть от типа используемого прибора, так при подсчете количества тромбоцитов у кошек и собак при помощи гематологического анализатора Bayer H-1 (предшественник Advia 2120) предполагаемое время образцов составляет порядка 2 дней с сохранением способности к аккуратному подсчету.

В данной статье упор будет делаться на мануальном подсчете количества тромбоцитов у кошек и собак, проводимом при гематологической оценке мазка крови

Показания/преимущества и недостатки

• Начальная оценка количества тромбоцитов.
• Является быстрым, дешевым и достаточно адекватным способом оценки количества тромбоцитов у кошек и собак. Данный метод достаточно информативен при анализе тяжелых отклонений количества тромбоцитов.
• Более точный подсчет количества тромбоцитов кошек и собак кошек и собак должен проводиться при использовании специализированных ветеринарных гематологических анализаторов.

Оборудование

• Порядка 2 мл свежей венозной крови, собранной в пробирку с антикоагулянтом (обычно трилон, он же EDTA).
• Микрогематокритная трубка.
• Предметные стекла.
• Распространитель (spreader) мазка.
• Гематологические краски (пр. Diff-Quik, Гимзе-Романовского).
• Микроскоп с возможностью работать под иммерсией.
• Иммерсионное масло.

Техника

1. Проверить кровь в пробирке на предмет формирования сгустков. При наличии сгустков – последующий подсчет будет не аккуратным (сниженным), следует отобрать повторный свежий образец.

2. Приготовление мазка крови и окрашивание подходящим красителем.

3. Исследование оперенного края мазка крови на предмет скопления (глыбок) тромбоцитов под средним увеличением. При наличии агрегации тромбоцитов - последующий подсчет будет не аккуратным, следует набрать свежий образец и повторить пункты 1-3.

4. Подсчет количества тромбоцитов в 5 полях зрениях под иммерсией, и подсчет среднего количества в 1 п/зр.

5. Один тромбоцит в п/зр соответствует 15 x 10⁹ тромбоцитов на литр крови. Альтернативный вариант – общее количество тромбоцитов в 5 полях зрения х 3 (слабый вариант). Нормальный показатель количества тромбоцитов собак и кошек составляет >200x10⁹/л.

Фото. Пример тромбоцитов в мазке крови собаки, они все помечены цифрами, 1 - гигансткий тромбоцит, 2-4 - обычные тромбоциты.
Окраска Гимзе-Романовского

Мануальный подсчет количества тромбоцитов у кошек и собак – старая версия

Показания

• Оценка количества тромбоцитов.

Оборудование

• Приблизительно 2 мл свежей венозной крови консервированной EDTA
• Микрогематокритная трубка
• Предметные стекла
• Покровные стекла (для приготовления мазка)
• Краска для мазков
• Микроскоп с иммерсионными линзами
• Иммерсионное масло

Техника

1. Проверить кровь в пробирке на предмет формирования сгустков. При наличии сгустков – последующий подсчет будет не аккуратным, следует отобрать свежий образец.

2. Приготовление мазка крови и окрашивание подходящим красителем.

3. Исследование оперенного края мазка крови на предмет глыбок тромбоцитов. При наличии глыбок - последующий подсчет будет не аккуратным, следует набрать свежий образец и повторить пункты 1-3.

4. Подсчет тромбоцитов в 5 полях зрениях под иммерсией, и подсчет среднего количества в 1 п/зр.

5. Один тромбоцит в п/зр соответствует 15 x 10⁹ тромбоцитов на литр крови. Альтернативный вариант – общее количество тромбоцитов в 5 полях зрения х 3.

Нормальный показатель количества тромбоцитов собак и кошек >200x10⁹/л.

Валерий Шубин, ветеринарный врач